生信学习小组Day7笔记-Chocolate Ice

基因测序

• 第一代基因测序技术

Sanger测序 图片来自https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2

• 第二代基因测序技术

（1）构建DNA文库

超声波将DNA分子打断成300-800bp长序列片段，再在两端加上互补配对的adapter，再通过PCR扩增达到一定浓度，构成单链DNA文库。

Adapter （图片来自微信公众号：生信星球）

（2）桥式PCR

桥式扩增（图片来自https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2）

桥式PCR完成后，形成了很多的桥形的互补双链，强碱解链，利用一种酶--甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）选择性的切掉lane上p5‘ 连接的链，只留下了与lane p7连接的链即Forward Strand. ------https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2

（3）测序

illumina采取了“一次加一个荧光碱基，用完失效”的办法。

测序（图片来自https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2）

（4）Index测序

上面的循环结束后，read product被冲掉，index1 primer和链上的index1 互补配对，进行index1的检测。测完后，洗脱产物，得到index1 的序列。接下来p5与lane上的p5‘配对，测得了index2，并洗脱

index测序（图片来自https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2）

• 第三代测序

SMRT测序原理（图片来自微信公众号：生信星球）

纳米孔单分子测序技术（图片来自微信公众号：生信星球）

总结

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