作者利用非病原性大肠杆菌尼斯氏菌作为多功能平台（SYNB1891），以开发用于治疗癌症的免疫疗法。该工程菌可靶向激活肿瘤中的吞噬性抗原提呈细胞（APC）的STING通路，并激活先天性免疫途径。SYNB1891治疗可产生有效的抗肿瘤免疫，并在鼠肿瘤模型中形成免疫记忆。
STING通过激活APC，产生I型IFN，新抗原交叉呈递给细胞毒性T细胞，随后启动肿瘤特异性T细胞反应，是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁。环二核苷酸(CDNs，如CDA)与STING结合并激活STING，触发I型IFN反应。作者开发了一种产生刺激剂的ECN治疗菌株，首先作者筛选了产生CDNs的酶，筛选了诱导型启动子。利用四环素诱导启动子(PTET)在ECN中表达了由编码dncv的霍乱弧菌、编码CDA的枯草芽孢杆菌和编码DACA的单核细胞增生性李斯特菌表达的3种CDA产生酶，并对其体外表达水平进行了评价。
最终，二腺苷酸环化酶(DACA)被选作进一步评价，因为它在ECN中的基因诱导后产生最高水平的CDA。表达DACA的ECN(SYN-PTET-DACA)与RAW 264.7巨噬细胞系共培养后，IFN-β1的分泌呈剂量依赖性，而未诱导的SYN-PTECT-DACA则无法诱导IFN-β1的产生。为评价体内活性，B16.F10被选为相关的肿瘤模型，因为这是一种炎症程度较低的肿瘤，这种肿瘤通常对免疫治疗是无效的。在B16.F10黑色素瘤荷瘤小鼠腹腔注射(i.p.)无水四环素(ATC)后将SYN-Ptet-DACA或非工程ECN瘤内注射。与体外获得的结果相似，在体内与非工程ECN相比，工程ECN产生CDA导致IFN-β1诱导增加。此外，SYN-PTET-DACA治疗在治疗开始后8天显著降低了肿瘤生长。虽然用工程和非工程ECN治疗均导致先天免疫相关的细胞因子(如肿瘤坏死因子α、GM-CSF、IL-6、IL-1β和CCl-2)在治疗24小时后增加，但仅SYN-PTET-DACA治疗在治疗8天后引起T细胞相关细胞因子(如IL-2、颗粒酶B和IFN-γ)的表达。综上所述，这些数据提示CDA在ECN中的工程表达能够额外激活I型IFN反应，并可在体内启动有效的T细胞抗肿瘤免疫。
