如何对荧光共定位进行定量分析?

2020-09-22 16:16:09 浏览数 (2)

荧光共定位是很常见的实验方法,一般用来验证2种或3种蛋白是否存在共定位关系。在常规Protocol的指导下进行实验操作,很容易得到双荧光或多重荧光染色图像。

这种图像,一般由红色通道(代表蛋白A)和绿色通道(代表蛋白B)两种图像merge后得到。

(红色通道:蛋白A)

(绿色通道:蛋白B)

仅仅通过肉眼和语言描述是很难说清楚蛋白A和蛋白B的共定位程度到底如何。因此,我们需要对这种共定位关系进行定量分析

今天的文章主要从操作上做出说明,之后将会从测量原理、分析、后期组图上系统地说明。


图文步骤

1. 请出老朋友Image Pro Plus,并打开一张共定位图像。

2. 点击Measure,选择Co-localization。

3. 因为是红绿通道,因此在弹窗中按照如下选项进行设置,然后点击Forward。

4.点完后,我们会得到一张图像。

(这是红色通道-绿色通道性形成的散点图,可以看出散点几乎都落在对角线上,说明红绿通道相关性极强,且红绿通道荧光强度基本相当。)

5. 接着再次按照如下设置勾选,然后点击Forward。

6. 然后我们会得到如下参数。

(数据是基于以上散点图进行回归分析,得到的皮尔逊相关系数为0.919032,重叠系数R为0.932092,接近1,说明红绿通道散点相关性极强!)

7.总结一下,操作后我们得到红绿通道散点图皮尔逊相关系数以及重叠系数,这三个要素是报告荧光共定位分析的最重要的数据,必须在论文中报告。

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