观察骨组织成熟的过程，是骨科领域必不可少的研究内容。
很多时候，我们必须要区分新生骨、成熟骨，有时还涉及到软件测算，常规HE染色显然无法完全满足要求。
那么，什么方法最好呢？
今天小编就聊一聊骨组织Masson染色及各种细节。
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骨HE染色的缺陷
一般来说，如果仅仅是为了观察骨组织结构，HE染色是可以胜任的，并且执行起来也很简便。
HE染色可以很好地区分骨组织结构、骨髓腔中的细胞(红系、粒系、巨核系、骨膜上的成骨细胞、腔中的破骨细胞、脂肪细胞)。如果仅仅观察性研究，采用HE是完全可以的，镜下也基本能够区分这些细胞类型。
然而，现在很多科研指标需要量化评价，即咱们常说的半定量研究。特别是研究骨折后骨痂形成过程时，我们必须采用特殊染色才可以半定量研究。
其中，小编是首推Masoon染色的。
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为什么选Masson染色
常规认识来看，Masson染色是用来显示结缔组织中的胶原，胶原被标记为绿或色者蓝色，其它组织染色为红色。
骨组织中主要存在1型胶原。
骨折后修复阶段，经Masson染色后，不同修复时期的骨基质中胶原纤维呈现红-绿相间。在骨折修复早期，红染区域较少，骨细胞核成骨细胞周围的绿染区域较多。修复后期，染色区域逐渐增大而绿染区域逐渐减少，表面成熟的骨组织在逐渐增多。
染色后效果如下↓
(甲苯胺蓝标记)
(甲基绿标记)
有了如此高的对比度，不采用Image Pro Plus计算一下都觉得可惜了。
关于Image Pro Plus软件半定量分析骨组织Masson染色的方法，参考这篇推文→ Image Pro Plus分析面积、面积比。道理是一样高的。
没有Image Pro Plus软件的朋友可在公众号后台发送“IPP”获取软件。
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骨Masson染色注意事项
骨组织Masson染色步骤是比较简单的，参照市售试剂的说明书操作进行染色即可，这里不再赘述。主要是想分析一下染色异常的原因，已方便大家改进。
（1）染色切片预处理
小编在上一篇推文中说过(做好骨组织切片，这一步最关键.......)，骨组织不同于一般性组织，想要染色好看，必须得控制脱钙环节。
如果脱钙不充分，或者脱钙后未充分清除残留的酸性脱钙液，那么后期所有的染色都会出现色差甚至根本无法染上色。因为病理染色很重要的一点就是要控制切片的PH值，对于Masson染色来说尤其如此，保持切片PH为中性是很有必须的。
此外，尽管存在不脱钙骨组织染色法，但是小编个人还是推荐脱钙后再进行Masson染色。
（2）切片厚度
小编推荐骨组织切片为4μm。太厚则后期染色极易脱片，就算不脱片也会造成染色过深，结构不清晰。太薄，无法完全显示出骨组织的各个层面精细结构。
（3）染色后脱水过程
很多的说明书或者文献都会说要梯度乙醇脱水，一般是50%、70%、80%、90%、100%、再次100%。
但坦诚来讲，这种梯度会洗掉切片的染色。于是很多人会发现，刚染完的切片在镜下挺好看，但是脱水、二甲苯后封片再看，会发现切片颜色变淡了，尤其胶原表达不多的骨组织更是如此。所以小编的经验是如果染色较浅，就尽量不要在低浓度乙醇中停留太多时间，尽快转至高浓度乙醇。
The end.
