1.反转录原理
反转录PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)又称为逆转录PCR。其原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。
2.反转录试剂盒
3.PCR酶和PCR体系
试剂盒:
其他试剂盒:
4.PCR程序
注:具体操作步骤可直接搜索对应试剂盒的说明书,大连宝生物官网:http://www.takarabiomed.com.cn/
RNA提取可阅读文章:TRlzol法提取组织或细胞的RNA
如果提取的RNA用于做定量PCR,提取的RNA 可直接用试剂盒(PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time))去除基因组DNA,同时反转录为cDNA。然后在用于做RT-qPCR。