HCC微环境中肿瘤免疫屏障的鉴定及其对免疫治疗效果的决定作用

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基本信息

题目：Identification of a tumour immune barrier in the HCC microenvironment that determines the efficacy of immunotherapy 期刊：Journal of Hepatology (IF: 26) 发表时间：2023 单位：上海交大 Lianxin Liu 组织类型：肝细胞癌。接受抗PD-1治疗有反应的3个病人，没有反应的5个病人，3个正常

eight patients with HCC receiving anti-PD-1 treatment (non-responders, n = 5; responders, n = 3) and adjacent normal tissue sections (n = 3).

组学：ST, scRNA 测序平台：10X Genomics 样本数：ST (11个样本，8个病人 3个正常), scRNA (6个non-responders；normal) 细胞数：83,799个细胞数据下载：Mendeley Data (skrx2fz79n)

背景知识

TIB: tumor immune barrier. 肿瘤免疫屏障

T-cell-inflamed gene expression profile（T细胞表达基因特征）是一种基因表达谱，用于预测临床对 PD-1 抑制治疗的反应。它是根据与IFN-c相关的mRNA的基因表达特征来评估肿瘤组织中T细胞的浸润情况和免疫活性。T-cell-inflamed gene expression profile可以帮助研究人员了解T细胞在肿瘤免疫中的作用，以及判断肿瘤免疫治疗的疗效。

we calculated the signature score of the T-cell-inflamed gene expression profile (GEP),23 an IFN-c–related mRNA profile iomarker to predict clinical response to PD-1 blockade, in each spot and theaverage expression of GEP genes in each spatial cluster.

实验流程

Tumor microarray (TMA,组织肿瘤芯片技术):对切片进行染色，以标记感兴趣的生物标记物.

空间转录组细胞类型注释

B/C/D: 根据分群和spot的特征，对抗PD-1治疗没有相应的样本，进行细胞类型划分。B为H&E染色结果，C为spot注释结果，D为细胞类型的markers.
E/F/G: 对抗PD-1治疗有相应的样本，进行细胞类型划分。E为H&E染色结果，F为spot注释结果，G为细胞类型的markers.

based on the unbiased clustering and spot features

重点突出：Non-responder组的恶性肿瘤细胞，被SPP1 macro/CAF包围，形成一个TIB

H: 细胞类型在11个ST样本中的占比
I: SPP1 macrophage 在NR中的占比显著高于R，
J: 在ICB non-responder 和 ICB responder 肿瘤组织中， SPP1, CD68, 和 COL1A1的分布
K: 多重免疫组化mIHC结果表明，在ICB non-responder 肿瘤组织中，SPP1 macro和CAF在一起。
L: 根据mIHC染色结果，在non-responder的肿瘤组织中（n=17）,SPP1 macro和CAF在一起的spot 显著高于 responder的肿瘤组织（n=8）

scRNA细胞类型注释

A: 对6个ICB non-responders 的癌及癌旁，共计83,793个细胞。进行大群注释，亚群注释等。
B: 细胞类型的markers;
C: 细胞类型在样本及组间的比例图；
D/E/F/G: hepatocytes/bipotent (D), T/NK (E), B/plasma (F), and ECs (G) 在样本和Tumor/Normal中的占比

髓系细胞类型注释

A: 将tumor_normal的myeloid注释为12个细胞亚型；
B: 12个细胞亚型在样本间的占比图；
C: SPP1 macrophage 在Tumor中的比例显著高；
D: 根据本研究的48个细胞类型的signature，用CIBERSORTx对TCGA-LIHC数据集，进行细胞类型鉴定，发现SPP1 macrophage在Tumor中显著高表达。
E: 通过FASC, SPP1 macrophage在non-responders (NR)显著高。注意E图的标记错了。 Scatter plot showed percentage of SPP1 macrophages of macrophages in ICB responders (R) and non-responders (NR) in FACS.
F: mIHC表明SPP1蛋白在tumor中比Normal中多。
G: 高SPP1 预后差；
H: TMA染色结果显示，SPP1蛋白在Tumor中显著高于正常组织；
I: 根据SPP1蛋白表达量高低，将59个病人分成2组，发现SPP1高的组，预后差。
J: 根据TCGA-LIHC数据，SPP1在晚期HCC病人中的比例多。 the proportion of SPP1 macrophages increased at the late stage in the TCGA-LIHC cohort (Fig. 3J)
K: SPP1 macro与其他macro相比，显著差异的代谢通路；
L: 在体外培养THP-1细胞系，在缺氧条件下，SPP1表达量升高。 THP-1细胞具有单核细胞/巨噬细胞的特征，可以在体外培养中分化为成熟的巨噬细胞

附图：

C: SPP1蛋白在肿瘤组织中多；
E/F: 用2个独立数据集，验证SPP1 Macrophage的预后差；
G/H/I/J: 只有SPP1 Macrophage的预后差；
K: SPP1 Macrophage 特异性高表达EPAS1,该基因与缺氧相关；
L/M: 两个macrophage特异高表达的markers
N: SPP1 Macrophage的吞噬作用最弱。

CAF/SPP1 Macrphage细胞相互作用

A: 对Fibroblast进行细胞亚群注释；
B: CAF在Tumor中的比例显著高高于Normal;
C: 在TCGA-LIHC数据集中，CAF在Tumor中的比例显著高高于Normal;
D: 在TCGA-LIHC-JP数据集中, CAF高表达，预后差
E/F: 根据scRNA-seq数据，用CAF top20的基因作为基因集，对每个spot进行打分，发现在SPP1/CAF中显著高;
G/H: 根据scRNA-seq数据，用SPP1 Macrophage top20的基因作为基因集，对每个spot进行打分,，发现在SPP1/CAF中显著高;
L: 病人1的ST数据中，CAF和SPP1 Macrophage 对应的spots中，CAF和SPP1 Macrophage得分的相关性。
M: CAF/SPP1 Macrophage spot的差异基因的代谢通路，与细胞外基质重塑相关；

利用NicheNet做CAF/SPP1 Macrphage之间的细胞通讯分析

附图

A: SPP1 Macrophage 活性最高的配体为TGFB1, SPP1, IL1B;
B: SPP1 Macrophage的配体，在CAF细胞中对应的受体；
C: SPP1 Macrophage/CAF的配受体，所对应的靶基因。

主图:

N: SPP1 Macrophage/CAF的配受体所对应的靶基因的富集通路；
O: 3个配体，对应的受体，及靶基因之间的调控网络图；
P: 根据scRNA-seq数据，计算SPP1 Macrophage top20的配体基因的平均表达量，将其映射到ST切片中。将CAF top20的受体的平均表达量，映射到ST切片中。
Q: SPP1 Macrophage top20的配体基因，和 CAF top20的受体基因的平均表达量，在ST分组中的热图展示。

细胞通讯分析

A/B: 利用CellChat，分析SPP1 Macrophage/CAF 和 malignant细胞，与其他细胞类型之间的细胞通讯。发现在non-responder样本中，SPP1 Macrophage/CAF 和 malignant细胞之间的通讯很多，而与其他细胞类型之间的通讯很少。在Responder样本中，SPP1 Macrophage/CAF 和 malignant细胞，与其他细胞类型之间的通讯很多。
C: 在Non-responder样本中，CD8 T浸润到肿瘤中很少；
D: 在Responder样本中，CD8 T浸润到肿瘤中很多；
E: 对所有的spot进行髓系免疫抑制 ( immunosuppressive features of myeloid cells) 在SPP1 Macrophage/CAF细胞群中比较高，说明免疫抑制能力强。同时ECM features 在SPP1 Macrophage/CAF细胞群中比较高，说明对细胞外基质重塑能力强。 suggesting that SPP1 macrophages may be associated with immunosuppressive function and that CAFs may be associated with the generation of ECM components.
F: T-cell-inflamed gene expression profile T细胞炎症基因集在空转spot中的表达量。发现GEP在TIB-enveloped肿瘤区域内表达量很低，说明PD-1治疗效果不好。
G: GEP基因集相关基因在空间细胞类型中的表达量。
H: Non-responder样本中，SPP1在肿瘤边缘，而CD8远离肿瘤组织；
I: Responder样本中，SPP1少，且CD8浸润到肿瘤组织；